Hepatic steatosis in six-banded armadillo (Euphractus sexcinctus Linnaeus, 1758) / Esteatose hepática em tatu-peba (Euphractus sexcinctus Linnaeus, 1758)

Abstract The six-banded armadillo (Euphractus sexcinctus) stands out among wild mammals due to the rare occurrence of spontaneous metabolic diseases. When altered, the liver, which is important in metabolism, may trigger a dysfunctional cascade, leading to hepatic steatosis. Here we describe a case of hepatic steatosis in a six-banded armadillo living in captivity. The female specimen was captured and donated to the Federal University of Piaui under SISBIO authorization nº53303. The animal was first referred for a veterinary clinical evaluation, and then euthanized following the ethical standards of the Federal Council of Veterinary Medicine. At the start of the dissection, the abdominal cavity was accessed and sections of all ex situ liver lobes, spleen and mandibular lymph node were subjected to routine histological processing; the results were photo documented. The anatomic and histopathological analysis confirmed the diagnosis of hepatic steatosis, which we propose is related to an infectious process as a result of the changes observed in the organs of the lymphoid system. This report of fatty liver disease in armadillo suggests an acute infectious process with lymphoid system involvement.

Resumo O tatu-verdadeiro (Euphractus sexcinctus) se destaca entre os mamíferos selvagens devido à rara ocorrência de doenças metabólicas espontâneas. Quando alterado, o fígado, que é importante no metabolismo, pode desencadear uma cascata disfuncional, levando a esteatose hepática. Foi descrito um caso de esteatose hepática em um tatu-verdadeiro vivendo em cativeiro. O espécime feminino foi capturado e doado para a Universidade Federal do Piauí sob a autorização SISBIO nº53303. O animal foi encaminhado para uma avaliação clínica veterinária e, depois, submetido à eutanásia seguindo os padrões éticos do Conselho Federal de Medicina Veterinária. No início da dissecção, acessou-se a cavidade abdominal e as seções de todos os lóbulos do fígado ex situ, do baço e do linfonodo mandibular foram submetidos ao processamento histológico de rotina. Os resultados foram fotomicrografados e documentados. A análise anatômica e histopatológica confirmou o diagnóstico de esteatose hepática, que está relacionada a um processo infeccioso como resultado das mudanças observadas nos órgãos do sistema linfóide. Este relatório de doença hepática gordurosa no armadillo sugere um processo infeccioso agudo com comprometimento do sistema linfático.

Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation / Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação

The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos' semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos' sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.(AU)

O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação. Além disso, as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão revelaram que espermatozoides congelados-descongelados apresentaram membranas plasmáticas danificadas, modificações nucleares como alterações na cromatina, e alterações acrossomais relativas à capacitação espermática. Em conclusão, este estudo é a primeira tentativa de criopreservação de sêmen em uma espécie de tatu, e nos auxiliou a identificar pontos críticos no processo de congelação-descongelação, a fim de melhorar o protocolo.(AU)

Mycobacterium leprae in six-banded (Euphractus sexcinctus) and nine-banded armadillos (Dasypus novemcinctus) in Northeast Brazil

Human beings are the main reservoir of the causative agent of leprosy, Mycobacterium leprae. In the Americas, nine-banded armadillos (Dasypus novemcinctus) also act as a reservoir for the bacillus. In the state of Ceará (CE), which is located in Northeast Brazil and is an endemic area of leprosy, there are several species of armadillos, including D. novemcinctus and Euphractus sexcinctus (six-banded armadillo). Contact between humans and armadillos occur mainly through hunting, cleaning, preparing, cooking and eating. This study identified M. leprae DNA in the two main species of armadillos found in Northeast Brazil. A total of 29 wild armadillos (27 D. novemcinctus and 2 E. sexcinctus) were captured in different environments of CE countryside. Samples from the ear, nose, liver and spleen from each of these animals were tested by a nested M. leprae-specific repetitive element polymerase chain reaction assay. The samples that tested positive were confirmed by DNA sequencing. M. leprae was detected in 21% (6/29) of the animals, including five D. novemcinctus and one E. sexcinctus. This is the first Brazilian study to identify the presence of a biomarker of M. leprae in wild armadillos (D. novemcinctus and E. sexcinctus) in a leprosy hyperendemic area where there is continuous contact between humans and armadillos.

Search for Mycobacterium leprae in wild mammals

Leprosy is still a worldwide public health problem. Brazil and India show the highest prevalence rates of the disease. Natural infection of armadillos Dasypus novemcinctus with Mycobacterium leprae has been reported in some regions of the United States. Identification of bacilli is difficult, particularly due to its inability to grow in vitro. The use of molecular tools represents a fast and sensitive alternative method for diagnosis of mycobacteriosis. In the present study, the diagnostic methods used were bacilloscopy, histopathology, microbiology, and PCR using specific primers for M. leprae repetitive sequences. PCR were performed using genomic DNA extracted from 138 samples of liver, spleen, lymph nodes, and skin of 44 D. novemcinctus, Euphractus sexcinctus, Cabassous unicinctus, and C. tatouay armadillos from the Middle Western region of the state of São Paulo and from the experimental station of Embrapa Pantanal, located in Pantanal da Nhecolândia of Mato Grosso do Sul state. Also, the molecular analysis of 19 samples from internal organs of other road killed species of wild animals, such as Nasua nasua (ring-tailed coati), Procyon cancrivoros (hand-skinned), Cerdocyon thous (dog-pity-bush), Cavia aperea (restless cavy), Didelphis albiventris (skunk), Sphigurrus spinosus (hedgehog), and Gallictis vittata (ferret) showed PCR negative data. None of the 157 analyzed samples had shown natural mycobacterial infection. Only the armadillo inoculated with material collected from untreated multibacillary leprosy patient presented PCR positive and its genomic sequencing revealed 100 percent identity with M. leprae. According to these preliminary studies, based on the used methodology, it is possible to conclude that wild mammals seem not to play an important role in the epidemiology of leprosy in the Middle Western region of the São Paulo state and in the Pantanal of Mato Grosso do Sul state.

Helminthological records of six-banded armadillos Euphractus sexcinctus (Linnaeus, 1758) from the Brazilian semi-arid region, Patos county, Paraíba state, including new morphological data on Trichohelix tuberculata (Parona and Stossich, 1901) Ortlepp, 1922 and proposal of Hadrostrongylus ransomi nov. comb. / Registros helmintológicos em tatus-peba Euphractus sexcinctus (Linnaeus, 1758) do semi-árido brasileiro, município de Patos, Paraíba, com dados acerca da morfologia de Trichohelix tuberculata (Parona and Stossich, 1901) Ortlepp, 1922 e proposição de Hadrostrongylus ransomi nov. comb.

This work aimed to evaluate the gastrointestinal helminthfauna composition of six-banded armadillos from the Brazilian semi-arid region. Gastrointestinal contents of six road-killed adult animals from Patos County, Paraíba State, were analyzed. Six species of nematodes, comprising five genera and four families, were recovered from the analyzed animals. New morphological data on Trichohelix tuberculata is given, along with a new taxonomical proposal for Hadrostrongylus ransomi (Travassos, 1935) n. comb. This is the first record for parasitic helminths in this host from the Brazilian semi-arid.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a composição da helmintofauna gastrintestinal de tatus-peba da região semi-árida brasileira. Conteúdos gastrintestinais de seis animais adultos atropelados nas rodovias do município de Patos, Paraíba, foram analisados. Seis espécies de nematódeos agrupados em cinco gêneros e quatro famílias foram obtidas. Novos dados morfológicos de Trichohelix tuberculata são relatados, e ainda é proposto Hadrostrongylus ransomi (Travassos, 1935) n. comb. Este é o primeiro relato de helmintos parasitas deste hospedeiro no semi-árido brasileiro.

Diversidade genética e filogeografia molecular de Euphractus sexcinctus e Dasypus novemcinctus (Mammalia: Xenarthra) através de ADN mitocondrial (citocromo b) / Genetic diversity and molecular phylogeography of Euphractus sexcinctus and Dasypus novemcinctus (Mammalia: xenarthra) through the mitochondrial DNA (Cytocrome b)

Para este estudo foi sequenciado o gene mitocondrial Citocromo b (1140pb) em amostras de ADN de 12 exemplares de Euphractus sexcinctus e 67 exemplares de Dasypus novemcinctus. Análises filogenéticas (distância, máxima parcimônia e máxima vesossimilhança) e populacionais (median-joining) foram realizadas com objetivo de estudar a variação genética e a filogeografica destas duas espécies. Também foi avaliada a posição filogenética de outros Dasypodidae (Dasypus kappleri, Cabassous unicinctus, C. tatouay e Tolypeutes tricinctus). Os resultados confirmaram a monofilia de Dasypodidae, Dasypodinae, Euphractinae e Tolypeutinae, assim como a relação maior entre as duas últimas sub-famílias. Em E. sexcinctus foram identificados 11 haplótipos e em D. novemcinctus 49. As análises mostraram o alto polimorfismo do gene Citocromo b, a falta de estruturação genética das populações, uma baixa divergência genética (distância p) entre os haplótipos e mostraram que o Rio São Francisco não constitui uma barreira ao fluxo gênico nestas duas espécies, uma vez que o mesmo haplótipo ocorreu em suas duas margens. Três haplótipos de E. sexcinctus formaram em todas as análises um grupo que se distribui na região da Caatinga do extremo nordeste do Brasil, ao norte do Rio São Francisco. As análises mostraram quatro grupos entre os haplótipos de D. novemcinctus (49 deste estudo e 26 do Genbank), com uma clara separação entre o haplótipo norte-americano de todos os demais sul-americanos. Entre os sul-americanos existem três grupos, um formado por 65 haplótipos que se distribuem no Brasil, Argentina e Paraguai. Os outros dois grupos são menores, um ocorrendo na região Norte do Brasil (Amazonas e Pará) com três haplótipos e outro formado por seis haplótipos que ocorrem na Bahia, Rio de Janeiro e Rondônia. Embora suas características morfológicas sejam compatíveis com as descrições de D. novemcinctus, exemplares destes dois últimos grupos mostraram diferenças morfológicas em seus crânios...

DNA samples of 12 specimens of Euphractus sexcinctus and 67 specimens of Dasypys novemcinctus had the mitochondrial gene Cytochrome b (1140pb) amplified and sequenced. Phylogenetic (distance, maximum parsimony and maximum likelihood) and population (median-joining) analyses were carried out in order to study the genetic variation and phylogeography of these two species. It was also assessed the phylogenetic position of other Dasypodidae: Dasypus kappleri, Cabassous unicinctus, C. tatouay and Tolypeutes tricinctus. The results confirmed the monophyly of Dasypodidae, Dasypodinae, Euphractinae and Tolypeutinae, as well as the relationship between the two largest sub-families. In E. sexcinctus 11 haplotypes and in D. novemcinctus 49, were identified. The analyses showed the high polymorphism of the gene Cytochrome b, a lack of population genetic structure, a low genetic divergence (p distance) between haplotypes and that Rio São Francisco is not a barrier to gene flow in these two species, once the same haplotype occur in both margins. Three haplotypes of E. sexcinctus formed, in all analyses, a group that is distributed in the region of Caatinga, the extreme northeastern Brazil, north of Rio São Francisco. Analyses were congruent in showing four groups among D. novemcinctus haplotypes (49 of this study and 26 of Genbank), with a clear separation between United States haplotype and all other South American ones. Among South American haplotypes there are three groups, one is formed by 65 haplotypes distributed in Brazil, Argentina and Paraguay. The other two groups are smaller, one occurring in northern Brazil (Para and Amazonas) with three haplotypes, and another formed by six haplotypes occurring in Bahia, Rio de Janeiro and Rondônia. Although morphologic characteristics are compatible with the descriptions of D. novemcinctus, the latter two groups showed some morphologic differentiation in their skulls that corroborate molecular data and suggest...